Toxicological study of bee venom (Apis mellifera mellifera) from different regions of the province of Buenos Aires, Argentina.

Samples of Apis mellifera mellifera venom from different hives in two regions of the Buenos Aires province and its pool were analyzed for their lethal potency, myotoxic, defibrinogenating, hemolytic and inflammatory-edematizing activity and for the histological alterations they produce in the heart, lungs, kidneys, skeletal muscle and liver of mice. In vitro studies focused on the venom's hemolytic activity in different systems and species (horse, man, sheep and rabbit), the cytotoxicity in cellular lines, and on the proteolytic and coagulant activity in plasma and fibrinogen. Hemolytic activity, either observed in vitro or in vivo, showed similar toxicity levels for all samples. Erythrocytes of different species varied in their sensitivity to the venom pool, equines being the most sensitive and sheep the most resistant to direct hemolytic action. Local and systemic myotoxicity was evidenced by either the elevation of serum creatine kinase and/or histopathological lesions, observed in different muscles. All samples caused significant pathological alterations; pulmonary, cardiac, renal and skeletal muscle lesions were substantive and can be related to the pathophysiological mechanisms of envenomation. The venoms from different apiaries and regions of the Buenos Aires province showed very similar toxicological characteristics. These results suggest that severity of envenomation in case of a swarming could therefore be more related to the number of bees than to the differential toxicity of the venom from different regions of the province. This is the first study on the toxicity and toxicological characteristics of Apis mellifera venom in Argentina.

Comparación entre dos métodos de producción para la elaboración de antivenenos ofídicos / Snake antivenin: Comparison between two production methods

Las mordeduras producidas por serpientes venenosas son un serio problema médico en varias regiones del mundo y sobre las cuales los sistemas de salud actúan en diferentes grados en lo referente a tratamiento y prevención. Sin embargo, el tratamiento de las mordeduras de serpientes venenosas en animales domésticos puede resultar difícil por diversos motivos, siendo uno de estos la baja oferta o ausencia de antivenenos para uso veterinario. Las presiones comerciales en la industria farmacéutica han llevado a una reducción en la producción de antivenenos en varias partes del mundo, su disponibilidad es, a veces, bastante limitada y en algunos casos, son imposibles de conseguir. En este trabajo, inmunizamos caballos con veneno de serpientes Sudamericanas para obtener el plasma hiperinmune que fue procesado para obtener IgG entera o fragmentos F(ab´)2 usando dos métodos convencionales (fraccionamiento por ácido caprílico o doble precipitación salina y digestión con pepsina). Los antivenenos así obtenidos fueron probados en sus características bioquímicas e inmunoquímicas, así como en su potencia neutralizante. El SDS-PAGE de los antivenenos mostró bandas en el orden de los 150 y 100 kDa en los antivenenos conteniendo IgG entera o fragmentos F(ab´)2, respectivamente. La presencia de albúmina o contaminantes de alto o bajo peso molecular no fue detectada en ninguna de las preparaciones. No se observaron diferencias importantes en la potencia neutralizante de los antivenenos, aunque el costo de producción fue mucho más bajo en la obtención de IgG completa. A partir de esto, se sugiere que los bajos costos de producción en la obtención de antivenenos de IgG entera para uso veterinario, hacen a esta tecnología adecuada y rentable cuando la producción de F(ab´)2 no es posible.

Bites by venomous snakes are a serious medical problem in several regions of the world, on which the different health systems act with different modalities. Nevertheless, the treatment of venomous snakebites in domestic animals can turn difficult due several problems among which, the conspicuous, is the low availability or lack of antivenoms for veterinary use. As commercial pressures on the pharmaceutical industry have led to a reduction in the production of antivenins in several parts of the world, their availability is sometimes rather limited and sometimes these products are impossible to obtain. In this work, we immunized horses with venom of South American vipers to obtain hyperimmune plasma. The plasma was processed to separate whole IgG of F(ab´)2 fragments using two conventional methods (caprylic acid fractionation or double saline precipitation and pepsin digestion). The obtained antivenins were tested for their biochemical and immunochemical characteristics and neutralizing potency. The SDS-PAGE of the antivenins showed, in the processed antivenin, bands in the order of 150 and 100 kDa in the whole IgG or F(ab´)2 fragments, respectively. The presence of albumin or contaminants of high or low molecular weight was not detected in any of the preparations. No important differences were observed in the neutralizing potency of the antivenins, although production cost was very low with the method used to obtain pure IgG. The low production cost makes the production of antivenins for veterinary use profitable when the production of F(ab´)2 fragments is not possible.

[Toxicity of venoms from snakes of medical importance in México]. / Toxicidad de venenos de serpientes de importancia médica en México.

The characterization of the toxic activities of snake venoms is necessary to understand the physiopathology of the envenomation and to test the potency of the antivenoms used to treat this pathology. Because of the lack of data on the toxic activities of venoms from Mexican snakes of medical importance, we studied the venoms from Bothrops asper, Athropoides nummifrr, Agkistrodon billineatus, Crotalus durissus durissus, Crotalus basiliscus, Crotalus scutulatus, Crotalus atrox and Micrurus nigrocinctus. The studies performed were: SDS-PAOE, determination of lethal potency, hemorrhagic, necrotizing, coagulation on plasma and fibrinogen, phospholipasic and fibri(noge)nolytic activities. In addition we studied the neutralizing capacity of the toxic activities of an antivenom currently used for the treatment of snakebites in Mexico. The venom from viperids showed important hemorrhagic, necrotizing, coagulative on plasma, prothrombinic, fibrinogenolytic and phospholipase activities. The venoms with the highest lethal potency were those of Micrurus nigrocinctus and Crotalus scutulatus; however, the viperine venom that globally displayed the most potent toxic activities was from Bothrops asper. All the venoms showed toxic activities of similar range to those described for other American venomous snakes. The activity on plasma or fibrinogen varied widely among the different venoms but all displayed capacity to act on the coagulation system. The antivenom tested not only neutralized the lethality B. asper venom but also its other toxic activities.

Toxicidad de venenos de serpientes de importancia médica en México / Toxicity of venoms from snakes of medical importance in Mexico

La caracterización de las actividades tóxicas de los venenos de serpientes es necesaria para el cabal entendimiento de los procesos fisiopatológicos que se producen ante su mordedura, como también para evaluar la potencia neutralizante de los antivenenos utilizados para tratar estos envenenamientos. A causa de los pocos datos disponibles sobre la toxicidad del veneno de serpientes con importancia sanitaria en México, estudiamos las actividades tóxicas de los venenos de Bothrops asper, Athropoides nummifer, Agkistrodon billineatus> Crotalus durissus durissus, Crotalus basiliscus, Crotalus scutulatus, Crotalus atrox y Micrurus nigrocinctus. A los venenos se les realizaron los siguientes estudios: SDS-PAUE, determinación de la potencia letal, y de las actividades hemorrágica, necrotizante, coagulante en plasma y fibrinógeno, fosfolipásica y fibrinogenolítica. Se estudió además la capacidad neutralizante de un antiveneno de uso corriente para la terapéutica de las mordeduras de serpientes venenosas en México, sobre varias de estas actividades. Los venenos de vipéridos mostraron actividades hemorrágicas, necrotizante, coagulante sobre plasma, protrombínica, fibrinogenolítica y fosfolipásica importantes. Los venenos de mayor potencia letal fueron los de Micrurus nigrocinctus y Crotalus scutulatus, sin embargo el veneno que presentó en general potencias tóxicas mayores fue el de Bothrops asper. Las diferentes potencias tóxicas halladas se encontraron dentro de los márgenes descritos para especies de vipéridos y elápidos de Sudamérica. La actividad sobre el plasma y el fibrinógeno fue muy diferente en los diferentes venenos viperinos, sin embargo todos mostraron ser capaces de afectar componentes del sistema de la coagulación. El antiveneno probado no sólo neutralizó la letalidad del veneno sino también sus actividades tóxicas.

The characterization of the toxic activities of snake venoms is necessary to understand the physiopathology of the envenomation and to test the potency of the antivenoms used to treat this pathology. Because of the lack of data on the toxic activities of venoms from Mexican snakes of medical importance, we studied the venoms from Bothrops asper, Athropoides nummifer, Agkistrodon billineatus, Crotalus durissus durissus, Crotalus basiliscus, Crotalus scutulatus, Crotalus atrox and Micrurus nigrocinctus. The studies performed were : SDS-PAOE, determination of lethal potency, hemorrhagic, necrotizing, coagulation on plasma and fibrinogen, phospholipasic and fibrinogenolytic activities. In addition we studied the neutralizing capacity of the toxic activities of an antivenom currently used for the treatment of snakebites in Mexico. The venom from viperids showed important hemorrhagic, necrotizing, coagulative on plasma, prothrombinic, fibrinogenolytic and phospholipase activities. The venoms with the highest lethal potency were those of Micrurus nigrocinctus and Crotalus scutulatus; however, the viperine venom that globally displayed the most potent toxic activities was from Bothrops asper. All the venoms showed toxic activities of similar range to those described for other American venomous snakes. The activity on plasma or fibrinogen varied widely among the different venoms but all displayed capacity to act on the coagulation system. The antivenom tested not only neutralized the lethalityB. asper venom but also its other toxic activities.

Effectiveness of two common antivenoms for North, Central, and South American Micrurus envenomations.

Micrurus snakes (coral snakes) may produce severe envenomation that can lead to death by peripheral respiratory paralysis. Only few laboratories produce specific antivenoms, and despite the cross-reactivity found in some Micrurus species venoms, the treatment is not always effective. To test two therapeutic antivenoms against the venom of four species of Micrurus from Southern America, North of South America, Central America, and North America, the determination of the lethal potency of the venoms, the study of some biochemical and immunochemical characteristics, and the determination of the neutralizing activity of both antivenoms were studied. North American and South American antivenoms neutralized well venoms from Micrurus species of the corresponding hemisphere but displayed lower effectiveness against venoms of species from different hemispheres. It was concluded that the neutralization of Micrurus venoms by regional antivenoms could be useful to treat the envenomation by some Micrurus snakes but is necessary to evaluate carefully the antivenoms to be used with the venoms from the snakes of the region. Also, considering the difficulties for coral snake antivenom production, the development of a polyvalent antivenom is useful to treat the envenomation by coral snakes from different regions is necessary.

Epidemiological and clinical aspects of scorpionism by Tityus trivittatus in Argentina.

This is a descriptive study of epidemiological and clinical aspects of stings caused by the scorpion Tityus trivittatus in Argentina. We analyzed 511 cases recorded from different health centers in 22 provinces. Most accidents took place during the period November-April (76%), in or nearby houses (86%). Over 50% of the accidents involved children and teenagers. Envenomation by T. trivittatus was mainly characterized by local symptoms: pain (85%), edema (26.6%), burning sensation (24.7%), erythema (20.7%), local hyperthermia (13.1%), paresthesia (9.8%) and general manifestations such as vomiting (25%), paleness (18.8%), headache (11.4%) and sweating (8.2%). Neurological, cardiovascular and respiratory disorders were uncommon. Almost 90% of the injured people got treated with specific antivenom within 2 h, 6% were treated 2-h after the accident and only 2 people were treated 12 or more hours after being stung. The global mortality recorded was 6 per 1000 cases. Scorpionism in Argentina is a public health problem under control due to the relatively low incidence and the accessibility of specific antivenom.

Neutralizacion cruzada de veneno de bothrops jararacussu por sueros antiofidicos heterologo / Cross neutralization of bothrops jararacussu venom by heterologous antivenoms

En la Argentina se utilizan tres tipos de sueros antiofídicos frete a la mordedura de crotálidos, el Anticrotálico Monovalente, contra el veneno de Crotalus durissus terrifucus ("víbora de cascabel"), el Botrópico Bivalente y el Botrópico Tetravalente ("Misiones") contra los venenos de las diferentes especies de Bothrops que se encuentran en la Argentina (las diferentes "y"rará")" Además, existe un suero Botrópico-Crotálico (Trivalente) el cual cubriria el mismo espectro que el Bivalente más el Anticrotálico. En este trabajo estudiamos la reactividad inmunoquímica de los sueros antibotrópicos Bivalente y Tetravalente, del Botrópico Crotálico (Trivalente) y del Anticrotálico Monovalente con el veneno de Bothrops jararacussu ("yararacuzú", "tapete dourado"). Además, se estudió la capacidad neutralizante de estos antivenenos sobre la potencia letal, y las actividades hemorrágica, necrotizante, procoagulante y hemolítica indirecta del veneno de B. jararacussu. La potencia neutralizante sobre las actividades biológicas y tóxicas de este veneno por todos los antivenenos utilizados es similar a la obtenida con el suero antibotrópico tetravalente (homólogo). Estos resultados sugieren la posibilidad de emplear sueros antibotrópicos heterólogos en el tratamiento de los accidentes por B. jararacussu.

Neutralizacion cruzada de veneno de bothrops jararacussu por sueros antiofidicos heterologo / Cross neutralization of bothrops jararacussu venom by heterologous antivenoms

En la Argentina se utilizan tres tipos de sueros antiofídicos frete a la mordedura de crotálidos, el Anticrotálico Monovalente, contra el veneno de Crotalus durissus terrifucus ("víbora de cascabel"), el Botrópico Bivalente y el Botrópico Tetravalente ("Misiones") contra los venenos de las diferentes especies de Bothrops que se encuentran en la Argentina (las diferentes "y"rará")" Además, existe un suero Botrópico-Crotálico (Trivalente) el cual cubriria el mismo espectro que el Bivalente más el Anticrotálico. En este trabajo estudiamos la reactividad inmunoquímica de los sueros antibotrópicos Bivalente y Tetravalente, del Botrópico Crotálico (Trivalente) y del Anticrotálico Monovalente con el veneno de Bothrops jararacussu ("yararacuzú", "tapete dourado"). Además, se estudió la capacidad neutralizante de estos antivenenos sobre la potencia letal, y las actividades hemorrágica, necrotizante, procoagulante y hemolítica indirecta del veneno de B. jararacussu. La potencia neutralizante sobre las actividades biológicas y tóxicas de este veneno por todos los antivenenos utilizados es similar a la obtenida con el suero antibotrópico tetravalente (homólogo). Estos resultados sugieren la posibilidad de emplear sueros antibotrópicos heterólogos en el tratamiento de los accidentes por B. jararacussu. (AU)

Capacidad neutralizante de los sueros antiofidicos frente al veneno de Bothrops moojeni (Caisaca, Lanzadera) / Neutralizing ability of antiophidic serum against the venom of Bothrops moojeni (lance-headed viper)

La serpiente Bothrops moojeni ("caisaca", "lanzadera", "lance-headed viper") es un crotalíneo de frecuencia de aparción escasa en la Argentina. Solamente se la ha encontrado y clasificado correctamente en la provincia de Misiones. Se realizó el estudio del veneno por electroforesis en condiciones no desnaturalizantes y en SDS-PAGE y se determinó la Dosis Letal 50. La reactividad inmunoquímica frente a los antivenenos botrópicos Bivalente y Tetravalente y por el Botrópico-Crotálico producidos por el Instituto Nacional de producción de Biológicos A.N.L.I.S Dr. Carlos G. Malbrán se determinó por doble inmunoprecipitación, inmunoelectroforesis, ELISA y Western-blot. Se estudió la capacidad neutralizante de estos sueros frente a las actividades letal, hemorrágica, necrótica, proteolítica, hemolítica indirecta (fosfolipásica) y procoagulante del veneno. Estos estudios dieron como resultado un muy alto grado de reactividad inmunoquímica y de neutralización heteróloga de las diferentes actividades del veneno por los antivenenos probados. Se puede concluir que los sueros antiofídicos antibotrópicos o botrópico-crotálico, distribuídos gratuitamente a las Delegaciones Sanitarias del país por el Ministerio de Salud y Acción Social, podrían ser utilizados ante los accidentes ofídicos por Bothrops moojeni debido a que neutralizan eficientemente las actividades tóxicas del veneno de este ofidio. (AU)

Capacidad neutralizante de los sueros antiofidicos frente al veneno de Bothrops moojeni (Caisaca, Lanzadera) / Neutralizing ability of antiophidic serum against the venom of Bothrops moojeni (lance-headed viper)

La serpiente Bothrops moojeni ("caisaca", "lanzadera", "lance-headed viper") es un crotalíneo de frecuencia de aparción escasa en la Argentina. Solamente se la ha encontrado y clasificado correctamente en la provincia de Misiones. Se realizó el estudio del veneno por electroforesis en condiciones no desnaturalizantes y en SDS-PAGE y se determinó la Dosis Letal 50. La reactividad inmunoquímica frente a los antivenenos botrópicos Bivalente y Tetravalente y por el Botrópico-Crotálico producidos por el Instituto Nacional de producción de Biológicos A.N.L.I.S Dr. Carlos G. Malbrán se determinó por doble inmunoprecipitación, inmunoelectroforesis, ELISA y Western-blot. Se estudió la capacidad neutralizante de estos sueros frente a las actividades letal, hemorrágica, necrótica, proteolítica, hemolítica indirecta (fosfolipásica) y procoagulante del veneno. Estos estudios dieron como resultado un muy alto grado de reactividad inmunoquímica y de neutralización heteróloga de las diferentes actividades del veneno por los antivenenos probados. Se puede concluir que los sueros antiofídicos antibotrópicos o botrópico-crotálico, distribuídos gratuitamente a las Delegaciones Sanitarias del país por el Ministerio de Salud y Acción Social, podrían ser utilizados ante los accidentes ofídicos por Bothrops moojeni debido a que neutralizan eficientemente las actividades tóxicas del veneno de este ofidio.